Real-time PCR检测Pm-cyclin Y的mRNA分布方法

1、首先，取9尾健康成熟的斑节对虾(体重大约150g)的卵巢、肝胰腺、脑、肠和胃等10个组织，用Trizol试剂手提法提取各个组织的总RNA。

3、然后，提取卵巢发育各期的总RNA,测定其纯度和浓度，80°C保存。将每3尾虾对应组织的总RNA混合作为一组，这样每个组织就得到了3组样品作为平行样，每组样品供3次实验重复操作。

5、然后，所得cDNA用p-actin引物检测，显示无杂带，稀释8倍，分装并放置在颍骈城茇-80°C，作为备用模板。设计特异性引物Cy-F(5'-CCCCTAAGTAAAGAACGA-3)和C烤恤鹇灭y-R(5-CAGAATAGCCACTGAACG-3)，内参基因EF-la的引物EF-F(S'-ATGGTTGTCAACTTCCCC-3)以及EF-R(S'-TTGACCTCCTTGATCACACC-3)。